Un dosaggio UV conteggia tutto ciò che assorbe a una lunghezza d’onda. L’HPLC prima separa i composti e poi conteggia quelli che indica. I due valori rispondono a domande diverse.
Arrivano due offerte per quello che sembra lo stesso estratto. Una indica il contenuto di composti attivi con l’UV, l’altra con l’HPLC, e il valore UV è nettamente più alto. Nessuno dei due è necessariamente sbagliato, e il materiale può anche essere lo stesso. I due metodi conteggiano cose diverse, e ciascuno esprime il proprio risultato in riferimento a una sostanza indicata.
Ecco sei verifiche da fare prima di confrontare due valori di dosaggio, oppure di confrontare un certificato con il risultato del tuo laboratorio. Si basano sulle linee guida europee sui medicinali vegetali, sulla linea guida internazionale sulla convalida dei metodi analitici e su studi pubblicati; l’esempio proviene dalle nostre specifiche. I nostri articoli precedenti riguardavano la specifica, il rapporto di estrazione, il certificato di analisi, il solvente e il supporto, e le righe dei contaminanti; questo si concentra sul metodo di dosaggio.
01 / IL METODO
La riga del dosaggio indica il metodo?
Un valore di dosaggio appartiene al metodo che lo ha prodotto. Le linee guida europee sui medicinali vegetali inseriscono questo principio nella loro definizione di specifica, “un elenco di prove, riferimenti a procedure analitiche e biologiche e criteri di accettazione appropriati”, e la conformità significa che il materiale, “se sottoposto a prova secondo le procedure analitiche elencate, soddisferà i criteri di accettazione elencati”.1
In una specifica il metodo è spesso una parola breve dopo il valore: UV, HPLC o un’altra tecnica. Una riga che non lo riporta è incompleta. Una rassegna del 2023 di autori dell’American Botanical Council e di organizzazioni partner osserva che i risultati dei dosaggi spettrofotometrici “sono talvolta gli unici dati sulla composizione chimica di un ingrediente botanico forniti in un certificato di analisi”, e aggiunge che dichiarare la metodologia alla base di un risultato quantitativo “dovrebbe diventare una pratica standard del settore”.2
Verifica: che la riga del dosaggio indichi il metodo e che la specifica, il preventivo e il certificato riportino lo stesso metodo.
02 / UV
Che cosa misura un valore UV?
In una specifica, UV sta per spettrofotometria UV-visibile. L’estratto viene disciolto, in molti dosaggi un reagente trasforma i composti di interesse in un prodotto colorato e si misura la luce che la soluzione assorbe a una lunghezza d’onda. I composti presenti nella soluzione non vengono separati l’uno dall’altro, quindi tutto ciò che assorbe a quella lunghezza d’onda si somma al risultato.2
La rassegna ne indica la conseguenza: le concentrazioni ottenute per spettrofotometria “sono spesso più elevate dei risultati di altri metodi quantitativi, a causa dell’interferenza di analiti non bersaglio che assorbono alla lunghezza d’onda di interesse”. Il suo esempio è l’estratto di cardo mariano, in cui le concentrazioni di silimarina “sono generalmente comprese tra il 30% e il 65% con HPLC-UV e pari al 65–80% con test spettrofotometrici”.2
La linea guida sulla convalida dei metodi analitici ha un nome per questa proprietà. Specificità e selettività descrivono “la misura in cui altre sostanze interferiscono con la determinazione di un analita”.3 Le linee guida europee sui medicinali vegetali prendono come esempio di dosaggio non specifico un dosaggio UV-visibile.1 Un valore UV è quindi un valore riferito a un gruppo di composti e va letto come tale.
Verifica: per un valore UV, quale gruppo di composti intende conteggiare, e il reagente e la lunghezza d’onda usati dal metodo.
03 / HPLC
Che cosa misura un valore HPLC?
L’HPLC, cromatografia liquida ad alta prestazione, separa l’estratto disciolto nei suoi composti prima di misurare qualsiasi cosa. I composti compaiono poi come picchi distinti e il metodo conteggia i picchi che indica. Anche il rilevatore posto dopo la colonna, di solito, misura la luce: la rassegna definisce il rilevatore UV/vis il “sistema di rilevazione più utilizzato”.2 La differenza principale tra i due metodi è la separazione.
Quindi un valore HPLC rappresenta i composti che il metodo indica, uno o più sommati, e la specifica dovrebbe dire quali. Il rapporto dell’Agenzia europea per i medicinali sul mirtillo nero lo illustra bene. Cita la definizione della Farmacopea europea per l’estratto secco raffinato e standardizzato di frutto fresco di mirtillo nero: dal 32,4% al 39,6% di antociani, “espressi come cloruro di cianidina 3-O-glucoside”. Il cromatogramma di quel dosaggio, secondo l’elenco riportato nel rapporto, mostra venti picchi identificati: quindici antociani e cinque antocianidine, cioè le loro forme prive della parte zuccherina.4
Un composto che il metodo non indica non viene conteggiato, per quanto ne contenga l’estratto. E alcuni gruppi si possono separare solo in parte: per le proantocianidine, osserva la rassegna, la separazione delle molecole più grandi “con mezzi cromatografici è difficile; di conseguenza, i fornitori usano in genere metodi spettrofotometrici per l’analisi quantitativa”.2
Verifica: per un valore HPLC, i composti conteggiati e se il valore è la loro somma o quello di un solo composto indicato.
04 / LO STANDARD
Rispetto a quale standard, e come viene espresso il risultato?
In un dosaggio del contenuto, nessuno dei due metodi legge una percentuale direttamente dal campione. Il segnale viene convertito in una quantità facendo riferimento a una sostanza indicata, che viene misurata in parallelo come standard oppure è incorporata nel calcolo; nelle linee guida europee gli standard di riferimento sono usati “per prove di identità e di purezza e per l’assegnazione del contenuto”.1 Il risultato viene poi espresso in riferimento a una sostanza o a un gruppo indicato. Le linee guida sulla dichiarazione delle sostanze vegetali e dei preparati vegetali mostrano la formulazione: per la foglia di senna, glicosidi idrossiantracenici “calcolati come sennoside B”; per un estratto di foglie di ginkgo, flavonoidi “espressi come glicosidi flavonici”.5 Ciò che è indicato non è sempre ciò che è stato misurato: i metodi di farmacopea per il ginkgo di solito determinano i flavonoidi dopo idrolisi acida, che stacca i loro zuccheri.2
Cambiando lo standard di riferimento cambia il valore, pur restando uguali il metodo e il materiale. Per le proantocianidine del cranberry misurate con una reazione colorimetrica, il dosaggio DMAC, uno studio riferisce che uno standard preparato a partire dal cranberry stesso “ha dato valori 2,2 volte superiori a quelli determinati con la procianidina A2”.6
Conta anche la forma della molecola. Il rapporto sul mirtillo nero descrive un estratto con due valori, “36% di antocianosidi, corrispondenti al 25% di antocianidine”: il secondo valore conteggia le stesse molecole senza la loro parte zuccherina.4
Il nostro estratto di cranberry è un esempio di dichiarazione di dosaggio che indica il metodo e lo standard. È specificato con almeno il 30% di proantocianidine solubili totali (PAC), misurate mediante BL-DMAC / UV-Vis ed espresse come equivalenti di procianidina A2. Il dosaggio utilizza la procianidina A2 come standard di riferimento e misura l’assorbanza a 640 nm; non determina la purezza delle PAC di tipo A isolate. I risultati ottenuti con metodi analitici o standard di calibrazione diversi non sono automaticamente confrontabili.
Verifica: lo standard di riferimento e la forma in cui è espresso il risultato: un composto indicato, un gruppo, oppure le molecole con o senza la loro parte zuccherina.
05 / LA SCELTA
Quale metodo è adatto al valore che ti serve?
L’HPLC non è il metodo migliore in ogni caso. La linea guida sulla convalida stabilisce che cosa deve dimostrare la convalida di qualsiasi metodo: “che la procedura analitica è idonea allo scopo previsto”.3 Quando il marcatore è un solo composto, o pochi, un metodo separativo può conteggiarli direttamente. Quando è un intero gruppo che la cromatografia non riesce a risolvere, lo strumento usuale è un dosaggio di gruppo.2
Uno studio condotto in più laboratori sul dosaggio DMAC per il cranberry lo ha definito “un dosaggio spettrofotometrico semplice, robusto e relativamente specifico per le PAC totali nei campioni di cranberry”, e ha aggiunto che “potrebbe non essere appropriato per confrontare le concentrazioni in diversi tipi di alimenti”.7
Un dosaggio di gruppo non può mostrare da dove provengano i composti: delle reazioni colorimetriche usate per le proantocianidine, la rassegna afferma che nessuna “può distinguere tra PAC di fonti diverse”.2 Le linee guida europee sui medicinali vegetali preferiscono una procedura specifica ovunque sia possibile; quando un dosaggio non specifico è giustificato, rimandano a una seconda prova: “si può usare una combinazione del dosaggio e di una prova di identificazione idonea (ad es. impronta cromatografica)”.1 La linea guida sulla convalida lo dice in termini generali: una mancanza di specificità “dovrebbe essere compensata da una o più altre procedure analitiche di supporto, a meno che non sia adeguatamente giustificata”.3
Verifica: che il metodo sia adatto al marcatore e, quando si usa un dosaggio di gruppo, quale prova di identificazione lo affianca.
06 / IL TUO LABORATORIO
La tua prova userà lo stesso metodo?
Un valore può essere confermato solo dal metodo che lo ha prodotto. Se il tuo laboratorio analizza una consegna con l’HPLC rispetto a una specifica basata sull’UV, il suo risultato non è un risultato rispetto a quella specifica, che risulti più basso o più alto. Non esiste un fattore generale per convertire un valore nell’altro: la differenza dipende da che cos’altro contiene l’estratto e da come viene espresso ciascun risultato.
Anche con un solo metodo, due laboratori non restituiscono lo stesso numero. Nello studio condotto in più laboratori, cinque laboratori hanno analizzato gli stessi undici campioni di cranberry con lo stesso metodo DMAC. I risultati variavano in media del 4,1% all’interno di un laboratorio e in media del 16,9% tra un laboratorio e l’altro (intervallo dall’8% al 32%), misurati come deviazione standard relativa.7
Quindi, prima dell’ordine, concorda tre cose: il metodo, per nome e con riferimento a una farmacopea o a una procedura scritta; lo standard di riferimento; e la differenza tra due laboratori che entrambe le parti accetteranno. Per i medicinali con una monografia di farmacopea, le linee guida europee dicono quale metodo prevale quando ne è stato usato un altro: “In caso di dubbio o di controversia fanno fede i metodi di analisi della Farmacopea.”1 Dove non si applica alcun metodo di farmacopea, tocca alla specifica concordata svolgere questo compito. Il nostro articolo sul certificato di analisi tratta le verifiche da fare quando il certificato arriva.
Verifica: che il tuo laboratorio e il laboratorio all’origine dei valori del certificato usino lo stesso metodo e lo stesso standard di riferimento, e quale differenza tra i loro risultati sia accettata da entrambe le parti.
COSA INVIARE
Indica il metodo insieme alla tua richiesta
Quando un valore di dosaggio conta per il tuo prodotto, indicaci:
- l’ingrediente e, se ne è offerta più di una, la parte della pianta;
- l’applicazione prevista e il mercato di destinazione;
- il composto o il gruppo che ti serve e il titolo desiderato;
- il metodo di dosaggio usato dal tuo team qualità e, se fa parte del dosaggio, lo standard di riferimento;
- se analizzerai tu stesso la consegna e con quale metodo;
- quali documenti tecnici ti servono, come la scheda di specifica o il certificato di analisi;
- il tuo nome, l’azienda e i recapiti.
Una percentuale di composti attivi è più significativa se associata al metodo analitico e allo standard di riferimento. Comunicaci questi requisiti insieme al titolo desiderato, affinché specifica e preventivo descrivano il materiale di cui il tuo progetto ha bisogno. Gli intervalli di specifica nel nostro catalogo sono riferimenti; fattibilità, disponibilità e prezzo vengono confermati con il preventivo.
L’esempio di prodotto è tratto dalle specifiche e dai documenti tecnici di YOHOLIFE®. Questo articolo non fornisce altri valori di dosaggio per i nostri ingredienti; il metodo e la specifica per un grado selezionato vengono confermati al momento della richiesta. Le fonti 1, 3, 4 e 5 sono state scritte per i medicinali e sono citate qui per le loro definizioni e i loro esempi; la fonte 2 è una rassegna di lavori pubblicati; le fonti 6 e 7 sono studi su un dosaggio per il cranberry e ne sono stati letti gli abstract pubblicati. Le fonti sono state verificate il 12 novembre 2026.
